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Material und Methoden

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Luftblasen unter dem Gel zu vermeiden.

Nach dem Pipettieren der DNA-Proben in die vorgesehenen Geltaschen

werden in Puffer getränkte Papierstreifenelektroden auf beiden Seiten des Gels

aufgebracht. Dabei ist zu beachten, dass diese nicht mehr als 5 mm weit auf

dem Gel liegen. Die Elektroden werden an eine Spannungsquelle

angeschlossen, wobei die Spannung in Abhängigkeit von der gewünschten

Lauftemperatur zu wählen ist. Bei einer Temperatur von 15°C lässt man die

Proben anfänglich für 10 Minuten bei 200 V, 23 mA und 5 W und anschließend

für weitere 60 Minuten bei 600 V, 30 mA und 18 W laufen. Bei einer

Lauftemperatur von 4°C lässt man das Gel für 4 Stunden bei 200 V, 23 mA und

5 W laufen, da eine höhere Spannung aufgrund der damit verbundenen

höheren Temperaturentwicklung zur Kondenswasserbildung führt und die

Qualität des Laufes beeinträchtigt.

Neben den zu untersuchenden Proben sollten immer zwei Kontrollproben

mitlaufen, von denen eine denaturiert und die andere nativ ist. Dies dient bei

der Auswertung der besseren Unterscheidung vom Wildtyp.

2.6.4 Auswertung

Das Gel wird nach Beendigung der Elektrophorese einer Silbernitratfärbung

unterzogen, die sich durch hohe Sensitivität der Darstellung und gute

Reproduzierbarkeit auszeichnet [HEUKESHOVEN u. DERNICK 1985].

Das Gel wird in einem Metallbecken für 30 Minuten mit 250 ml Fixierlösung 1x

versetzt. Um eine gleichmäßige Färbung zu erreichen, wird das Becken auf

einen Plattformschwenker gestellt. Der Fixierung schließt sich die

Silberimprägnierung an. Dazu wird die Fixierlösung verworfen und das Gel für

weitere 30 Minuten in 250 ml Silbernitratlösung 1x gebadet. Anschließend

verwirft man auch diese Lösung und schwenkt das Gel für einige Minuten in

deionisiertem Wasser. In dieser Zeit wird die Fixierlösung angesetzt. Da diese

sehr instabil ist, sollte sie erst unmittelbar vor Gebrauch hergestellt werden. Zu

50 ml Entwicklerlösung werden 250

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Formaldehyd pipettiert und das Ganze mit deionisiertem Wasser auf 250 ml

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Brak uwag

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