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Material und Methoden

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verändert.

Die Kenntnis der Nukleotidsequenz und die Vervielfältigung des zu

untersuchenden DNA-Abschnittes mittels PCR, wobei die Fragmentlänge 300

bp nicht überschritten werden sollte, sind Voraussetzungen für dieses

Verfahren. Die entsprechenden Primer binden im Intronbereich und schließen

somit die gesamte kodierende Sequenz inklusive der dazugehörigen Splice-

Sites ein. Handelt es sich bei den zu untersuchenden Exonbereichen um

Fragmente mit einer Länge über 300 bp, müssen mehrere Fragmente mit

überlappenden Sequenzen ausgesucht werden.

Die PCR-Produkte werden vor der eigentlichen Elektrophorese erhitzt und somit

in Einzelstränge aufgespalten. Nach Beendigung des Laufes erfolgt eine

Anfärbung des Gels mit Silbernitrat.

2.6.2 Material

2.6.2.1 Geräte

•

Thermomixer Modell 5436 (Fa. Eppendorf, Hamburg)

•

Kühlgenerator Multi Temp® III Kat. Nr. 18-1102-78 (Fa. Pharmacia Biotech,

Uppsala/Schweden)

•

ElektrophoresisUnit Multiphor® II Kat. Nr. 18-1018-06 (Fa. Pharmacia Biotech,

Uppsala/Schweden)

•

GelPool Kat. Nr. 18-1031-58 (Fa. Pharmacia Biotech, Uppsala/Schweden)

•

PaperPool Kat. Nr. 18-1031-59 (Fa. Pharmacia Biotech, Uppsala/Schweden)

2.6.2.2 Chemikalien

•

CleanGel DNA Analysis Kit Kat. Nr. 17-1198-06 (Fa. Pharmacia Biotech,

Uppsala/Schweden) beinhaltet

CleanGel 48S Sammelgel (5%)

Trenngel (10%)

Gelpuffer Puffer pH 8,45

0,001% Bromphenolblau

0,001% Orange G

1 2 ... 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 ... 130 131

Brak uwag

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